导语
内容提要
李玮瑜、李姗、张洪映主编的《基因工程实验指南》主要介绍植物分子生物学实验中基本技术的原理和操作流程,按照实验进程的顺序,由浅入深,由简至繁,向初学者逐步介绍各种实验操作技术。本书的设计围绕着综合两字展开,它不是由彼此孤立的、相互间缺乏内在联系的一个个实验组成的,而是把生物学研究中最常用的那些实验技术,按照逻辑顺序有机地揉合在一起,构成了一个前后连贯、相互呼应的整体,从而体现了实验的综合性。
本书共分七个章节:第一章系统介绍了关于仪器设备的工作原理和使用规范;第二章主要介绍了核酸提取、分离和纯化实验方法,并对实验相关的理论进行了比较系统的阐述;第三章详细介绍了不同物种中蛋白质的提取、分离和纯化的技术手段;第四章主要介绍了载体构建所需的程序及原理;第五章列举了常用的探究蛋白质之间互作的手段和技术;第六章详细介绍了如何利用不同的技术手段转化作物;第七章概括介绍了常用试剂的配制方法。
本书是一本既具有一定的理论体系,又具有通用性和指导性作用的实验教学用书。主要面向高等本科院校生命科学、作物学及分子生物学初级研究者。
目录
第一章 仪器设备
分子生物学实验室常用仪器设备简介
第二章 核酸
第一节 核酸的构成
第二节 基因组DNA的提取
第三节 TENS法提取微生物基因组DNA
第四节 DNA的扩增
第五节 DNA片段的琼脂糖凝胶电泳和回收纯化
第六节 DNA重组及鉴定
第七节 核酸分子杂交技术
第八节 Southern blotting技术
第九节 植物总RNA的提取和检测
第十节 poly(A)+RNA的提取
第十一节 无菌感染期线虫RNA的提取
第十二节 果蝇总RNA的提取
第十三节 哺乳动物RNA的提取
第十四节 反转录RNA
第十五节 半定量PCR技术
第十六节 实时荧光定量PCR技术
第十七节 N0rthem bloting技术
第十八节 核酸染色
第十九节 双脱氧链终止法测序技术
第二十节 焦磷酸测序(Pyrosequencing)
第二十一节 核酸信息分析
第三章 蛋白质
第一节 定量蛋白质组学
第二节 植物蛋白的提取
第三节 动物蛋白质的提取
第四节 动物细胞器蛋白的提取
第五节 细菌蛋白质的提取
第六节 原核表达
第七节 用IPTG诱导大肠杆菌表达重组绿色荧光蛋白
第八节 蛋白质的定量
第九节 聚丙烯酰胺变性凝胶电泳
第十节 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
第十一节 双向凝胶电泳
第十二节 Westem bolting技术
第十三节 蛋白质转印实验半干式
第十四节 蛋白质转印实验电泳液式
第十五节 蛋白质染色
第十六节 染色质免疫沉淀技术(ChIP)
第十七节 凝胶迁移实验(EMSA)
第十八节 超迁移EMSA(Super-Shift EMSA)
第十九节 蛋白质序列分析
第四章 载体构建及扩繁
第一节 DNA限制性内切酶酶切分析
第二节 PCR产物连接
第三节 连接产物的转化
第四节 挑菌与摇菌
第五节 保菌
第六节 菌液PCR检测
第七节 质粒提取
第八节 质粒DNA的电泳检测
第九节 ABl3730XL测序实验程序
第十节 感受态细胞的制备
第十一节 农杆菌转化法
第十二节 基于毛细管电泳的荧光检测SSR实验程序
第五章 蛋白质-蛋白质相互作用
第一节 目标蛋白的亚细胞定位
第二节 酵母双杂交
第三节 酵母文库的筛选
第四节 免疫共沉淀
第五节 GST融合蛋白进行Pullaow实验
第六节 双分子荧光互补(BiFC)
第七节 荧光共振能量转移[Fluorescence resonance energy transfer(FRET)]
第八节 Far Westem blotting印迹法
第九节 酵母单杂交实验
第十节 原生质体提取及转化步骤
第六章 作物转化
第一节 浸蘸法转化拟南芥
第二节 农杆菌侵染法转化烟草
第三节 烟草瞬时表达
第四节 农杆菌侵染法水稻
第五节 生理指标的测定
第七章 常用试剂的配制
第一节 抗生素溶液的配制
第二节 常用缓冲液的配制
第三节 常用培养基的配制
参考文献