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现代分子生物学实验(第2版)

  • 定价: ¥32
  • ISBN:9787040504804
  • 开 本:16开 平装
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  • 折扣:
  • 出版社:高等教育
  • 页数:265页
  • 作者:编者:郑伟娟
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  • 2019-08-01 第2版
  • 2019-08-01 第1次印刷
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导语

  

内容提要

  

    本书的编写注重实用性和创新性统一,在实验内容的编排上不再按照“基础实验+综合实验”的基本模式,而是依据分子生物学研究的主要内容,分为特定基因的克隆、克隆基因的表达和表达产物的纯化、基因的编辑和表达水平的调控、基因表达水平的检测和基因功能的研究、蛋白质与蛋白质的相互作用、DNA与蛋白质的相互作用、小分子与蛋白质的相互作用七章,每章整合若干实用的分子生物学研究技术实验,使学生对每一个实验的目的和适用领域更加明确,也便于从事不同研究方向的研究生和青年教师快速选择相关实验技术参考借鉴。
    书中既包含了分子生物学最为基础和常用的实验技术,如基因的克隆、表达和纯化,定点突变、逆转录PCR、western blotting、pull—down、免疫沉淀、荧光显微镜使用、EMSA、染色体免疫共沉淀等,也涵盖了目前分子生物学研究中先进的研究技术和研究方法,如酵母双杂交技术、二维电泳、RNA干扰、实时荧光定量PCR、流式细胞仪分析、荧光共振能量转移(FRET)技术等。
    为方便读者使用,每一章前都有综述,介绍相关的研究背景;每个实验都有实验原理的介绍;实验步骤中特别强调操作的注意事项和实验取得成功的关键;多数实验附有实验结果,供选用本书的师生参考。
    本书适合作为高等院校生命科学类及相关专业分子生物学实验课程的教材使用,也可供相关科研及实验技术人员参考。

目录

第l章  特定基因的克隆
  附1.1  Bad基因介绍
  实验1.1  从核酸数据库中获得mBad基因编码序列
  实验1.2  从细胞中提取总RNA
  实验1.3  逆转录获得小鼠B16F10细胞的cDNA
  实验1.4  PCR扩增目的基因mBad
  附1.2  mBad基因PCR引物的设计
  实验1.5  PCR产物的琼脂糖凝胶电泳回收
  实验1.6  SDS碱裂解法提取质粒DNA
  实验1.7  用质粒DNA小量抽提试剂盒制备质粒DNA
  附1.3  克隆载体的选择
  实验1.8  DNA的限制性酶切和酶切产物的回收
  附1.4  酶切位点的选择
  实验1.9  连接
  附1.5  平端DNA的连接反应
  实验1.10  转化
  实验1.11  阳性重组子的筛选以及测序验证
第2章  克隆基因的表达和表达产物的纯化
  实验2.1  His6一EGFP在大肠杆菌中的表达和纯化
  附2.1  融合蛋白表达载体pHis—EGFP的构建及融合蛋白的亲和纯化结果
  实验2.2  GST-EBFP融合蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化
  附2.2  GsT—EBFP的纯化结果
  实验2.3  GST—EBFP在巴氏毕赤酵母中的表达
  附2.3  pPIC-GST-EBFP重组质粒的构建、鉴定
  实验2.4  GST-EBFP在昆虫细胞中的表达纯化
  附2.4  重组AcNPv-EGFP病毒的构建与筛选
第3章  基因的编辑和表达水平的调控
  实验3.1  用重叠延伸PCR法进行EGFP基因的定点突变
  附3.1  重叠延伸PCR法基因定点突变的实验结果
  实验3.2  用单管大引物PCR法进行EGFP基因的快速定点突变
  附3.2  单管大引物PCR法基因定点突变的实验结果
  实验3.3  利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术敲除鼠源细胞系FADD基因
  实验3.4  人DNMn基因干扰质粒shRNA真核表达载体的构建
  附3.3  干扰质粒的设计
  实验3.5  质粒DNA的大量纯化
  实验3.6  mBad基因在293T细胞中的瞬时表达
  实验3.7  脂质体转染哺乳动物细胞MCF-7及稳定转染细胞系筛选
  附3.4  质粒转染结果
第4章  基因表达水平的检测和基因功能的研究
  实验4.1  实时荧光定量PCR法检测DNMn基因mRNA表达水平
  附4.1  荧光定量PCR实验结果
  实验4.2  western blotting检测瞬时转染基因的表达
  实验4.3  荧光显微镜分析特定蛋白质的表达及定位
  附4.2  I.PS刺激下RAW264.7细胞中NF-KB(p65)的定位改变
  附4.3  激光共聚焦显微镜和超高分辨显微镜简介
  实验4.4  流式细胞仪检测紫杉醇对A549细胞周期的影响
  附4.4  紫杉醇处理对A549细胞周期的影响
  实验4.5  流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞增殖
  附4.5  流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞的增殖
  实验4.6  流式细胞仪检测细胞凋亡
  附4.6  流式细胞仪检测Jurkat淋巴瘤细胞的凋亡
第5章  蛋白质与蛋白质的相互作用
  实验5.1  酵母双杂交体系发现FADD与Fas的相互作用
  实验5.2  二维电泳比较FADD和FADD细胞株的蛋白质表达差异
  附5.1  SDS一聚丙烯酰胺凝胶的经验配方
  附5.2  二维电泳常见问题与解决办法
  实验5.3  GST pull—down验证FADD与Fas的相互作用
  附5.3  GST pull—down验证FADD与Fas相互作用的结果示意图
  实验5.4  免疫共沉淀分析FADD与Fas相互作用的结构域
  附5.4  Fas与FADD不同结构域相互作用的C口IP结果示意图
  实验5.5  荧光共振能量转移(FRET)技术分析FADD与Fas相互作用
  实验5.6  利用噬茵体肽库展示技术筛选与链霉亲和素特异性结合的氨基酸序列
第6章  DNA与蛋白质的相互作用
  实验6.1  EMSA分析转录因子NF-kB与DNA结合序列的结合
  实验6.2  染色质免疫沉淀(ChIP)分析NF-kB与WM同基因启动子序列的结合
  实验6.3  报告基因检测技术分析不同细胞中PSMA基因的启动子活性
第7章  小分子与蛋白质的相互作用
  实验7.1  等温滴定量热法测定谷胱甘肽转移酶与谷胱甘肽的结合
  实验7.2  表面等离子共振技术测定穿心莲内酯与BAX蛋白的结合
  实验7.3  细胞内热迁移法测定穿心莲内酯与BAX蛋白在细胞内的结合
  附7.1  穿心莲内酯(Andro)处理下BAX的胞内热迁移实验结果
  实验7.4  微量热泳动法测定穿心莲内酯与BAX蛋白的结合
附录I  常用溶液配制
附录Ⅱ  网络资
附录Ⅲ  常用仪器及供应商
附录Ⅳ  著名生物试剂公司及其特色产品
附录Ⅴ  常用工具酶
附录Ⅵ  实验室常用技术参数资料