导语

  

内容提要

  

    本书是“十二五”普通高等教育本科国家级规划教材《普通生物化学》（陈钧辉教授等编著）的配套实验教材。本书在第五版使用的基础上进行了修订，全书共十章，100多个实验，内容设置与《普通生物化学》教材一致，包括糖类、脂质、蛋白质、核酸、酶、维生素、激素、物质代谢与生物氧化，涵盖了当今生物化学研究中常用的技术和方法，既保留了一些旨在加强学生基本实验方法和技能训练的传统实验，也引进了一些新近发展起来的生化实验技术。同时，还增加了为培养学生应用能力和创新能力的综合实验，每个实验后附有思考题，非常适合作为本科教学的同步教材。为进一步拓宽学生的知识面，另有一些生物化学仪器分析的内容及部分配套实验操作视频放在科学出版社教学服务网站上，供读者观看。
    本书内容全面，可操作性强，实验重复性好，可作为高等院校生物化学及相关专业大学生的实验教材，也可供相关教师和科研人员参考。

第六版前言
第五版前言
第一章  糖类
  实验1  糖的颜色反应
    实验1.1  莫氏实验
    实验1.2  塞氏实验
    实验1.3  杜氏实验
  实验2  糖的还原作用
  实验3  糖的旋光性和变旋现象
  实验4  血糖的定量测定（Folin-Wu法）
  实验5  血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）
  实验6  血液中葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）
  实验7  植物组织中可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）
  实验8  总糖和还原糖的测定（3,5-二硝基水杨酸法）
  实验9  淀粉的制备与水解
  实验10  淀粉的分离纯化及其组分含量的测定
  实验11  果胶的提取与果胶含量的测定
第二章  脂质
  实验12  脂肪的组成
  实验13  卵磷脂的提取和鉴定
  实验14  粗脂肪含量的测定（Soxhlet抽提法）
  实验15  碘价的测定（Hanus法）
  实验16  皂化价的测定
  实验17  脂肪酸价的测定
  实验18  脂肪乙酰价的测定
  实验19  血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）
  实验20  血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）
  实验21  血清胆固醇的定量测定（乙酸酐法）
  实验22  血清甘油三酯简易测定法
  实验23  血清甘油三酯的测定（GPO-PAP法）
  实验24  丙二醛（MDA）的测定
第三章  蛋白质
  实验25  蛋白质的颜色反应
  实验26  蛋白质的沉淀反应
  实验27  蛋白质浓度测定（微量凯氏定氮法）
  实验28  蛋白质浓度测定（双缩脲法）
  实验29  蛋白质浓度测定（Folin-酚试剂法）
  实验30  蛋白质浓度测定（紫外光吸收法）
  实验31  蛋白质浓度测定（考马斯亮蓝结合法）
  实验32  非蛋白氮（NPN）的测定
  实验33  甲醛滴定法
  实验34  DNP-氨基酸的制备和鉴定
  实验35  DNS-氨基酸的制备和鉴定
  实验36  用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N-端氨基酸
  实验37  用DNS法测定多肽的氨基酸组成
  实验38  肽的序列分析（PTH法）
  实验39  尿素对蛋白质的变性作用
  实验40  氨基酸纸层析法
  实验41  氨基酸微晶纤维素薄板层析法
  实验42  离子交换柱层析法分离氨基酸
  实验43  血清白蛋白的分离与纯化
  实验44  凝胶层析法分离纯化蛋白质
  实验45  DEAE-SephadexA-25分离纯化多肽
  实验46  亲和层析法分离纯化单克隆抗体
  实验47  醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
  实验48  血清糖蛋白醋酸纤维薄膜电泳
  实验49  牛乳中酪蛋白和乳糖的制备与鉴定
  实验50  聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法分离血清蛋白质
  实验51  聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法鉴定胰岛素
  实验52  SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量
  实验53  用等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点
  实验54  对流免疫电泳法测定胎儿甲种蛋白质
  实验55  火箭免疫电泳法
  实验56  Western印迹
  实验57  酶联免疫吸附测定（ELISA）
第四章  核酸
  实验58  核酸的定量测定（定磷法）
  实验59  酵母RNA的提取
  实验60  RNA的定量测定（苔黑酚法）
  实验61  动物肝脏中DNA的提取
  实验62  DNA的定量测定（二苯胺法）
  实验63  5'-核苷酸的定量测定（过碘酸氧化法）
  实验64  DEAE-纤维素薄板层析法测定核苷酸
  实验65  核酸的酶法降解以及葡聚糖凝胶层析法制备5′-单核苷酸
  实验66  质粒DNA的提取
  实验67  DNA琼脂糖凝胶电泳
第五章  酶
  实验68  影响酶促反应的因素——温度、pH、激活剂及抑制剂
  实验69  胰蛋白酶米氏常数的测定
  实验70  胆碱酯酶米氏常数的测定
  实验71  过氧化氢酶米氏常数的测定
  实验72  用正交法测定几种因素对酶活力的影响
  实验73  胰蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氯对胰蛋白酶的抑制作用
  实验74  溶菌酶的提纯结晶和活力测定
  实验75  猪胰糜蛋白酶的制备和纯度鉴定
  实验76  大肠杆菌碱性磷酸酶的制备
  实验77  碱性磷酸酶的提取和分离及比活力测定
  实验78  大蒜细胞SOD的提取和分离及活力测定
  实验79  琼脂糖凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶
  实验80  聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶
  实验81  肝脏谷丙转氨酶活力测定
  实验82  血清谷丙转氨酶活力测定
第六章  维生素
  实验83  维生素A的定性测定
  实验84  维生素B1的定性测定
  实验85  维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
  实验86  维生素C的定量测定（磷钼酸法）
  实验87  核黄素（维生素B2）荧光光度定量测定法
  实验88  胡萝卜素的定量测定
  实验89  荧光法测定核黄素结合蛋白-核黄素的解离常数
第七章  激素
  实验90  甲状腺素的测定
  实验91  雌二醇的测定
第八章  物质代谢与生物氧化
  实验92  肌糖原的酵解作用
  实验93  脂肪酸的β-氧化
  实验94  发酵过程中无机磷的被利用和ATP的生成（ATP的生物合成）
第九章  综合实验
  实验95  肝素钠的分离提纯及含量测定
    实验95.1  肝素钠粗制品的制备之（Ⅰ）——盐解法
    实验95.2  肝素钠粗制品的制备之（Ⅱ）——酶解法
    实验95.3  肝素钠粗制品的纯化
    实验95.4  肝素钠的生物测定法
    实验95.5  肝素钠的定量测定
  实验96  用高效液相层析（HPLC）定量测定胰岛素中的氨基酸
    实验96.1  胰岛素的酸水解
    实验96.2  用HPLC定量测定胰岛素水解产物中的氨基酸
  实验97  维生素C对过氧化氢（H2O2）诱导的小鼠巨噬细胞氧化损伤的保护作用
    实验97.1  小鼠腹腔巨噬细胞的收集与培养
    实验97.2  MTT法测定巨噬细胞死亡率
    实验97.3  活性氧检测试剂盒探测细胞内活性氧的水平
    实验97.4  NO和NO合成酶活性的测定
  实验98  酵母醇脱氢酶的提纯及其性质的研究
    实验98.1  酵母醇脱氢酶的提纯
    实验98.2  酵母醇脱氢酶的凝胶层析
    实验98.3  酵母醇脱氢酶的专一性
    实验98.4  酵母醇脱氢酶的动力学研究
  实验99  α-淀粉酶的分离纯化、鉴定和Km、Vmax的测定
    实验99.1  α-淀粉酶的活力测定
    实验99.2  α-淀粉酶的疏水层析
    实验99.3  α-淀粉酶的离子交换柱层析
    实验99.4  聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法鉴定α-淀粉酶
    实验99.5  米氏常数（Km）和最大反应速率（Vmax）的测定
  实验100  螺旋藻藻蓝蛋白的分离、纯化与鉴定
    实验100.1  螺旋藻粗藻蓝蛋白的制备
    实验100.2  离子交换柱层析法分离藻蓝蛋白
  实验101  原花色素的提取、纯化与测定
    实验101.1  山楂原花色素的提取
    实验101.2  原花色素的测定（Ⅰ）
    实验101.3  原花色素的测定（Ⅱ）
  实验102  熊果酸的制备和测定
    实验102.1  山楂熊果酸的制备
    实验102.2  熊果酸含量测定
  实验103  镍化合物诱导人Jurkat细胞凋亡途径的研究
    实验103.1  Jurkat细胞的培养
    实验103.2  AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
    实验103.3  RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2的表达
    实验103.4  酶联免疫吸附检测Bcl-2蛋白表达水平
  实验104  cDNA的制备与鉴定
    实验104.1  从HepG2细胞中提取总RNA
    实验104.2  逆转录获得人HepG2细胞的cDNA
    实验104.3  cDNA中肝癌相关基因AFP的鉴定
第十章  临床生化指标的自动测定
附录
  一、生物化学实验须知
  二、玻璃仪器的洗涤及一些常用的洗涤剂
  三、移液器的使用
  四、吸管的使用
  五、过滤和离心
  六、930型荧光光度计的使用
  七、UV2600紫外可见分光光度计的使用
  八、Nano-200超微量核酸分析仪
  九、自动生化分析仪
  十、全自动免疫分析仪TOSOHAIA2000标准化操作规程
  十一、血红蛋白检测仪Bio-RadD-10标准化操作规程
  十二、实验室常用酸碱的相对密度和浓度
  十三、常用酸碱指示剂
  十四、缓冲液的配制
  十五、恒沸盐酸的制备
  十六、大肠杆菌丙酮粉的制备
  十七、生物化学中某些重要化合物的Mr及pK值
  十八、氨基酸的一些物理常数
  十九、某些蛋白质的物理性质
  二十、化学元素的相对原子质量表
  二十一、离心机转速（r/min）与相对离心力（RCF）的换算
  二十二、硫酸铵饱和度的常用表
  二十三、常用离子交换剂
  二十四、常用凝胶过滤层析介质
主要参考文献