导语

  

内容提要

  

    本教材参照我国农业人才培养目标和教学要求，设置了核酸提取和检测，蛋白质提取、纯化和检测，目的基因的检测及其表达分析，重组质粒的构建及其遗传转化，分子杂交和互作相关技术五部分内容，包括25个目前常用的分子生物学实验。这些实验技术比较符合当前农学学科特点和农业科研机构的需求。每个实验都包括背景知识、实验原理、实验目的、实验材料、试剂与仪器、实验步骤及其解析、实验结果与报告、思考题、研究案例、附录、拓展知识和参考文献等内容。附录主要介绍实验室常用溶液和培养基的配制过程，以期为学生和实验员提供方便和较为全面的参考资料。
    本教材内容适当，编排合理，专业适用面宽，适用于农学、植物保护、园艺、种子科学与工程、草业科学和生物技术等农业科学专业的本科生分子生物学实验教学和初进实验室研究生的实验参考。

第一部分  核酸的提取和检测
  实验一  植物基因组DNA提取及其检测
  实验二  细菌质粒DNA的提取和电泳检测
  实验三  植物总RNA提取及其检测
  实验四  植物小RNA的提取
第二部分  蛋白质提取、纯化和检测
  实验五  重组蛋白的提取和纯化
  实验六  植物总蛋白的提取和电泳检测
  实验七  小麦叶片蛋白双向电泳分析
  实验八  Western印迹法
第三部分  目的基因的检测及其表达分析
  实验九  PCR扩增目的基因片段
  实验十  分子标记的开发和应用
  实验十一  半定量RT-PCR技术的原理及应用
  实验十二  实时荧光定量PCR
  实验十三  基因表达部位的原位杂交检测
  实验十四  亚细胞定位实验
第四部分  重组质粒的构建及其遗传转化
  实验十五  DNA片段的回收和连接
  实验十六  重组子的转化和蓝白斑筛选
  实验十七  重组质粒的酶切验证
  实验十八  农杆菌蘸花法转化拟南芥
  实验十九  根瘤农杆菌介导的玉米遗传转化
  实验二十  小麦基因枪转化（瞬时表达）
第五部分  分子杂交和互作相关按术
  实验二十一  利用酵母双杂交技术筛选靶蛋白的互作蛋白
  实验二十二  融合蛋白沉降技术分析蛋白质的相互作用
  实验二十三  酵母单杂交系统及其应用
  实验二十四  电泳迁移率实验——检测蛋白质-DNA结合相互作用
  实验二十五  染色质免疫共沉淀